|  |
pg2013.ru / Указ
"Методические указания по определению остаточных количеств клефоксидима в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.1455-03"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24.06.2003)
Официальная публикация в СМИ:
"Сборник методических указаний", выпуск 4, М., Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2007
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
24 июня 2003 года
Дата введения:
30 июня 2003 года
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ
КЛЕФОКСИДИМА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА
МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.1455-03
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина), Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич) при участии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (А.П. Веселов).
2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.
4. Введены впервые.
1. Вводная часть
Фирма-производитель: БАСФ АГ, Германия.
Торговое название: АУРА.
Действующее вещество: клефоксидим (BAS 625 Н).
2-[1-(2-(4-хлорфенокси)пропоксиимино)-бутил]-3-оксо-5-тиан-3-илциклогекс-1-енол (ИЮПАК).
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H ClNO S.
24 32 4
Молекулярная масса: 466,04.
Бесцветная вязкая жидкость.
Температура плавления: 185 °С (с разложением).
Давление паров при 25 °С: <...>
Коэффициент распределения н-октанол/вода: log P = <...>
Растворимость (г/л) при 20 град. С: ацетон и этилацетат - более 700, 2-пропанол - 330, этанол - 67, вода - 5,3 мг/л.
Стабильность к гидролизу при 25 град. С (в темноте): DT = менее 1 часа (рН 5), 140 дней (рН 7) и более 300 дней (рН 9).
Вещество стабильно при нормальных условиях хранения.
Краткая токсикологическая характеристика:
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс - более 5000
50
мг/кг; острая дермальная токсичность (LD ) для крыс - более 4000
50
мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC ) для крыс - более
50
5,2 мг/куб. дм воздуха. Вещество не оказывает раздражающего
действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика. LC для рыб -
50
12,8 мг/куб. дм (96 час.).
Клефоксидим не токсичен для пчел, птиц и диких животных. Гигиенические регламенты применения вещества в России не установлены.
Область применения препарата:
Клефоксидим - гербицид системного действия из группы ингибиторов биосинтеза жирных кислот. Он быстро проникает в листья и корни вегетирующих растений и передвигается в точки роста. Предназначен для уничтожения однолетних и многолетних злаковых сорных растений в посевах риса, независимо от способа его выращивания. Применяется для обработки в период от фазы 2 - 3 листьев до конца кущения у злаковых сорняков (рис при этом должен иметь не менее 3 листьев).
Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Аура (BAS 525 Н) (концентрат эмульсии, содержащий 75 г клефоксидима в 1 л препарата) на рисе в качестве избирательного гербицида при норме расхода препарата до 2,7 л/га.
2. Методика определения остаточных
количеств клефоксидима в воде, почве, зерне и соломе риса
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на определении клефоксидима методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после извлечения вещества из воды хлористым метиленом, из почвы и растительного материала - ацетоном, очистки экстрактов перерастворением в хлористом метилене и на концентрирующих патронах-колонках Диапак-диол и Диадак-амин.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания риса.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Таблица 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДА
-------T---------------------------------------------------------¬
¦Анали-¦ Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 ¦
¦зируе-+-----------T------------T-------T------T--------T--------+
¦мый ¦Предел ¦Диапазон ¦Среднее¦Стан- ¦Относит.¦Довери- ¦
¦объект¦обнаруже- ¦определяемых¦значе- ¦дарт- ¦стан- ¦тельный ¦
¦ ¦ния, ¦концентра- ¦ние ¦ное ¦дартное ¦интервал¦
¦ ¦мг/куб. дм,¦ций, ¦опреде-¦откло-¦отклоне-¦средне- ¦
¦ ¦мг/кг ¦мг/куб. дм, ¦ления, ¦нение ¦ние DS, ¦го, %, ¦
¦ ¦ ¦мг/кг ¦% ¦S, % ¦% ¦ +/- ¦
+------+-----------+------------+-------+------+--------+--------+
¦Вода ¦0,002 ¦0,002 - 0,02¦81,2 ¦4,7 ¦2,1 ¦+/- 4,4 ¦
¦Почва ¦0,02 ¦0,02 - 0,2 ¦80,4 ¦5,0 ¦2,2 ¦+/- 4,6 ¦
¦Зерно ¦0,05 ¦0,05 - 0,5 ¦79,2 ¦4,8 ¦2,2 ¦+/- 4,5 ¦
¦Солома¦0,10 ¦0,10 - 1,0 ¦87,4 ¦5,4 ¦2,4 ¦+/- 5,0 ¦
L------+-----------+------------+-------+------+--------+---------
Таблица 2
ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕФОКСИДИМА В МОДЕЛЬНЫХ МАТРИЦАХ
(n = 5)
--------T-----------------T---------T----------------------------¬
¦Матрица¦ Внесено ¦Открыто %¦ Доверительный интервал ¦
¦ ¦мг/куб. дм, мг/кг¦ ¦ среднего результата, % ¦
+-------+-----------------+---------+----------------------------+
¦Вода ¦0,002 ¦78,4 ¦+/- 4,7 ¦
¦ ¦0,004 ¦80,6 ¦+/- 5,0 ¦
¦ ¦0,010 ¦81,8 ¦+/- 5,5 ¦
¦ ¦0,020 ¦84,0 ¦+/- 3,2 ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Почва ¦0,02 ¦76,5 ¦+/- 5,5 ¦
¦ ¦0,04 ¦80,6 ¦+/- 4,3 ¦
¦ ¦0,10 ¦81,4 ¦+/- 4,1 ¦
¦ ¦0,20 ¦83,9 ¦+/- 2,7 ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Зерно ¦0,05 ¦77,1 ¦+/- 6,9 ¦
¦ ¦0,10 ¦80,0 ¦+/- 4,7 ¦
¦ ¦0,20 ¦78,3 ¦+/- 5,0 ¦
¦ ¦0,50 ¦81,4 ¦+/- 3,5 ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦Солома ¦0,10 ¦82,8 ¦+/- 6,9 ¦
¦ ¦0,20 ¦87,1 ¦+/- 4,5 ¦
¦ ¦0,50 ¦89,1 ¦+/- 3,9 ¦
¦ ¦1,0 ¦90,7 ¦+/- 2,2 ¦
L-------+-----------------+---------+-----------------------------
2.2. Реактивы, растворы и материалы
Клефоксидим с содержанием д.в. 98,8% (БАСФ, Германия).
Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.
Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-82.
Вода дистиллированная или деионизованная, ГОСТ 7602-72.
н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.
Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.
Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76.
Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77.
Концентрирующие патроны Диапак-диол, АО БиоХимМак (117899, Москва, Воробьевы горы, МГУ), ТУ 4215-002-05451931-94.
Концентрирующие патроны Диапак-амин, АО БиоХимМак (117899, Москва, Воробьевы горы, МГУ), ТУ 4215-002-05451931-94.
Метилен хлористый, ГОСТ 12794-80.
Натрия сульфат безводный, х.ч., ГОСТ 4156-76.
Спирт метиловый, х.ч., ГОСТ 6995-77.
Фосфора пентоксид, ч., МРТУ 6-09-5759-69.
Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил - вода (85:15, по объему).
Элюент для Диапак-диола: смесь гексан:хлористый метилен (1:1, по объему).
Фильтры бумажные синяя лента, ТУ 6-09-1678.
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Altex (США) или аналогичный.
Самописец регистрирующий фирмы Kipp. a. Zonen BD 41 или аналогичный.
Колонка хроматографическая длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, заполненная Диасорбом 130-С15 Т или Диасорбом 130-С8 Т зернением 7 мкм (АО БиоХимМак; Москва, Воробьевы горы, МГУ).
Шприц для ввода образцов в жидкостной хроматограф емкостью 100 мкл.
Медицинский шприц с разъемом типа Люер для ввода образцов в концентрирующий патрон Диапак.
Аппарат для встряхивания АВУ, ТУ 64-1-1081-83.
Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74.
Водоструйный насос, ГОСТ 10695-75.
Мельница электрическая лабораторная, ТУ 45-22-236-79, или аналогичная.
Прибор для перегонки при атмосферном давлении.
Ротационный испаритель, тип ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.
Воронка Букзена, ГОСТ 0147-73.
Воронки для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75.
Колба Букзена, ГОСТ 5614-75.
Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы мерные вместимостью 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Колбы грушевидные вместимостью 50, 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Пипетки мерные вместимостью 1, 2 и 5 мл, ГОСТ 20292-74Е.
Пробирки градуированные с притертыми пробками вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 10515-75.
Цилиндры мерные вместимостью 50, 100 и 250 мл, ГОСТ 1770-74.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (№ 2051-79 от 21.08.79).
Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 град. С не более 3 месяцев. Пробы почвы высушивают при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния и хранят в стеклянной емкости в холодильнике не более 3 месяцев. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 град. С в течение 2 дней, при температуре -18 град. С в течение месяца.
Перед анализом зерно и солому размалывают на мельнице, сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л
ацетона 10 г KMnO и 2 г и 2 г K CO ).
4 2 3
Ацетонитрил сушат над пентаксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.
2.5.2. Подготовка подвижной фазы ВЭЖХ
Отмеряют 850 мл ацетонитрила, переносят в мерную колбу на 1000 мл, добавляют 150 мл бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
2.5.3. Кондиционирование колонки и концентрирующих патронов
Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил - вода (85:15, по объему) в течение 30 минут при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизации базовой линии (5 - 15 минут).
Концентрирующий патрон Диапак-диол промывают последовательно с помощью медицинского шприца 10 мл хлористого метилена и 6 мл смеси гексан - хлористый метилен (1:1, по объему), а патрон Диапак-амин - 10 мл ацетона и 6 мл смеси гексан - ацетон (8:2, по объему) со скоростью 5 мл/мин.
2.5.4. Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор клефоксидима с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 98,8% д.в., в метаноле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
Рабочие стандартные раствора с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора клефоксидима соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.2). Рабочие растворы готовятся и используются в день анализа.
2.5.5. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 50 мкл рабочего стандартного раствора клефоксидима с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации клефоксидима в растворе в мкг/мл.
2.5.6. Проверка хроматографического поведения клефоксидима на концентрирующих патронах-колонках Диапак
2.5.6.1. Диапак-диол
В грушевидную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора клефоксидима с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл смеси гексан - хлористый метилен (1:1, по объему) и наносят на кондиционированный патрон. Промывают патрон 5 мл этой же смеси со скоростью 1 мл/мин. Отбирают фракции по 1 мл каждая, упаривают растворитель, остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.2) и анализируют на содержание клефоксидима по п. 2.7.
Фракции, содержащие клефоксидим, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п. 2.7. Рассчитывают содержание клефоксидима в элюате, определяют полноту вымывания вещества из патрона.
2.5.6.2. Диапак-амин
В грушевидную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора клефоксидима с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл смеси гексан - ацетон (8:2, по объему) и наносят на кондиционированный патрон. Промывают патрон 4 мл смеси гексан - ацетон (8:2) и затем 12 мл ацетона со скоростью 1 мл/мин. Отбирают фракции по 1 мл каждая, упаривают растворитель, остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.2) и анализируют на содержание клефоксидима по п. 2.7.
Фракции, содержащие клефоксидим, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п. 2.7. Рассчитывают содержание клефоксидима в элюате, определяют полноту вымывания вещества из патрона.
Примечание: Профиль вымывания клефоксидима может меняться при использовании новой партии патронов-колонок Диапак и растворителей.
2.6. Описание определения
2.6.1. Экстракция клефоксидима
2.6.1.1. Вода. 100 мл предварительно отфильтрованной воды помещают в делительную воронку емкостью 250 мл и трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 30 мл при энергичном встряхивании в течение 1 минуты. Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 град. С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание клефоксидима по п. 2.7.
2.6.1.2. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают н коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл ацетона и суспензию перемешивают в течение 40 минут на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Почву повторно экстрагируют 50 мл ацетона при встряхивании в течение 20 минут и суспензию фильтруют. Из объединенного фильтрата отбирают четвертую часть объема (около 35 мл) раствора, эквивалентную 5 г почвы, и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 град. С. Дальнейшую очистку проводят по п. 2.6.2.
2.6.1.3. Зерно, солома. Навеску размолотого зерна (10 г) или соломы (5 г) помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 50 мл ацетона и суспензию перемешивают в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Осадок переносят в колбу, приливают 50 мл ацетона и повторно перемешивают 30 минут на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр и из объединенного фильтрата отбирают пятую часть объема (около 20 мл) раствора, эквивалентную соответственно 2 г зерна и 1 г соломы. Растворы упаривают досуха на роторном испарителе при 30 град. С и остатки очищают по п. 2.6.2.
2.6.2. Очистка на патронах Диапак
Сухой остаток в колбе, полученный по п. 2.6.1.2 или 2.6.1.3, растворяют двумя 10 мл порциями хлористого метилена и раствор переносят в грушевидную колбу емкостью 50 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 град. С. Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси гексан - хлористый метилен (1:1, по объему) и раствор наносят на кондиционированный патрон Диапак-диол (п. 2.5.3), который затем промывают 5 мл этой же смеси со скоростью 1 мл/мин. Элюат собирают в грушевидную колбу емкостью 25 мл и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 град. С. Остаток переносят двумя 1-мл порциями смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) в подготовленный патрон Диапак-амин (п. 2.5.3) и промывают 4 мл этой же смеси, которые отбрасывают. Клефоксидим элюируют из патрона 12 мл ацетона со скоростью 1 мл/мин. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 град. С. Сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.2) и анализируют на содержание клефоксидима по п. 2.7.
Примечание: При использовании новой партии патронов Диапак или растворителей проводится проверка хроматографического поведения клефоксидима на патронах Диапак-диол и Диапак-амин.
2.7. Условия хроматографирования
Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Aitex (США) или аналогичный.
Самописец регистрирующий фирмы Kipp. a. Zonen BD 41 или аналогичный.
Хроматографическая колонка длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Диасорб 130-С16 Т6 зернением 7 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза ацетонитрил - вода (85:15, по объему).
Скорость потока элюента: 0,8 мл/мин.
Рабочая длина волны: 280 нм.
Чувствительность детектора: 0,01 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 50 мкл.
Скорость протяжки ленты самописца: 10 см/час.
Время выхода клефоксидима: около 6 мин.
Линейный диапазон детектирования: 5 - 50 нг.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
Альтернативная неподвижная фаза: Диасорб 130-С8 Т.
Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (85:15, по объему).
Скорость потока элюента: 0,8 мл/мин.
Время выхода клефоксидима: 4,8 мин.
2.8. Обработка результатов анализа
Содержание клефоксидима рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
Н х А х V
1
Х = ----------,
Н х m
0
где:
Х - содержание клефоксидима в пробе, мг/кг или мг/куб. дм;
Н - высота пика образца, мм;
1
Н - высота лика стандарта, мм;
0
А - концентрация стандартного раствора клефоксидима, мкг/мл.
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,
мл;
m - масса или объем анализируемого образца, г или мл (для
воды - 100 мл; для почвы - 5 г; для эерка - 2 г; для соломы - 1
г).
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
4. Разработчики
Дубовая Л. В., научный сотр.; Макеев А.М., зав. лабораторией, канд. биол. наук.
ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-86.
------------------------------------------------------------------
--------------------
| | |
|
