|  |
pg2013.ru / Указ
"Методические указания по определению остаточных количеств просульфурона в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур, зеленой массе и зерне кукурузы, семенах льна методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.1804-03"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 18.12.2003)
Официальная публикация в СМИ:
"Сборник методических указаний", выпуск 5, М., Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2007
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
18 декабря 2003 года
Дата введения:
с 1 апреля 2004 года
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРОСУЛЬФУРОНА В ВОДЕ,
ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР, ЗЕЛЕНОЙ
МАССЕ И ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ, СЕМЕНАХ ЛЬНА МЕТОДОМ
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.1804-03
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (проф. Т.В. Юдина), Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин) при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (гл. специалист А.П. Веселов), под редакцией член-корр. РАМН В.В. Ракитского.
2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России (прот. № 20 от 2 декабря 2003 г.).
3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 18 декабря 2003 г.
4. Введены впервые.
1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ
Фирма-производитель: Сингента Кроп Протекшн (Швейцария).
Торговое название: ПИК.
Действующее вещество: просульфурон (АЕ F115005)
1-(4-метокси-6-метил-1,3,5-триазин-2-ил)-3-[2-(3,3,3-трифторпропил)-фенилсульфонил]мочевина (ИЮПАК)
N-[[(4-метокси-6-метил-1,3,5-триазин-2-ил)амино]карбонил]-2-(3,3,3-трифторпропил)бензолсульфонамид(С.А.).
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H F № O S.
15 16 3 5 4
Молекулярная масса: 419,4.
Химически чистый просульфурон представляет собой белое кристаллическое вещество без запаха.
Температура плавления: 155 °С (с разложением).
-3
Давление паров при 25 °С: < 3,5 х 10 мПа.
Коэффициент распределения н-октанол/вода: К log Р =
ow
= 1,5 (рН 5,0), - 0,21 (рН 6,9), - 0,76 (рН 9) (25 °С).
Плотность 1,45 г/куб. см.
-4 -1
Генри < 3 х 10 Па х куб. м х моль .
Растворимость (г/л) при 25 °С: гексан - 0,0064, толуол - 6,1, этанол - 8,4, этилацета-56, ацетон - 160, дихлорметан - 180; растворимость в воде (мг/л): 87 (рН 5), 4000 (рН 6,8), 43000 (рН 7,7).
Быстро гидролизуется при рН 5 (DT = 5 - 10 дней) и очень
50
медленно при рН 7 и 9.
В биологически активных почвах в аэробных условиях
просульфурон достаточно быстро разлагается (DT = 5 - 23 дня,
50
DT = 30 - < 100 дней (обычно 60 дней)). В силу высокой скорости
50
разрушения в почве гербицид не вымывается глубже чем на 50 см.
Краткая токсикологическая характеристика
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс и мышей - 986 и
50
1247 мг/кг, соответственно; острая дермальная токсичность (LD )
50
для кроликов более 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность
(LC ) для крыс более 5000 мг/куб. м воздуха. Просульфурон не
50
оказывает раздражающего действия на слизистые оболочки глаз и кожу
кроликов и не обладает тератогенным и мутагенным эффектами.
Гербицид практически нетоксичен для птиц, рыб, пчел, диких животных, дождевых червей, дафний и водорослей.
Гигиенические нормативы для просульфурона в России не установлены.
Область применения препарата
Просульфурон - послевсходовый гербицид системного действия из класса сульфонилмочевин. Вещество достаточно хорошо поглощается листьями и передвигается в акропетальном и базипетальном направлениях в различные органы растения. Просульфурон в дозах от 12 до 40 г д.в. на 1 га эффективно уничтожает однолетние и многолетние двудольные сорные растения в посевах зерновых злаков, кукурузы и сорго, на пастбищах и в дернине. Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Пик, ВДГ (750 г/кг) в качестве гербицида на зерновых колосовых культурах при норме расхода 15 - 45 г/га и однократной обработке за сезон в период от фазы кущения до начала выхода в трубку.
2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРОСУЛЬФУРОНА
В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР,
ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ, СЕМЕНАХ ЛЬНА МЕТОДОМ
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на определении просульфурона с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором после извлечения препарата из воды хлористым метиленом, из почвы, семян льна и соломы водным ацетонитрилом, из зерна и зеленой массы смесью метанол - фосфатный буфер при ультразвуковой обработке, последующей очистки экстрактов путем перераспределения действующего вещества между несмешивающимися растворителями и на колонке с силикагелем.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания зерновых культур, кукурузы и льна.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Таблица
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
--------T--------------------------------------------------------¬
¦Анали- ¦ Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 ¦
¦зируе- +-------T---------T----------T--------T--------T---------+
¦мый ¦Предел ¦Диапазон ¦Среднее ¦Стандар-¦Относи- ¦Довери- ¦
¦объект ¦обнару-¦определя-¦значение ¦тное от-¦тельное ¦тельный ¦
¦ ¦жения, ¦емых кон-¦определе- ¦клоне- ¦откло- ¦интервал ¦
¦ ¦мг/куб.¦центра- ¦ния, % ¦ние, ¦нение, %¦среднего,¦
¦ ¦дм, ¦ций, ¦ ¦S, % ¦ ¦% ¦
¦ ¦мг/кг ¦мг/куб. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦дм, мг/кг¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------+-------+---------+----------+--------+--------+---------+
¦Вода ¦0,001 ¦0,001- ¦91,9 ¦3,1 ¦1,4 ¦+/- 2,9 ¦
¦ ¦ ¦0,01 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------+-------+---------+----------+--------+--------+---------+
¦Почва ¦0,01 ¦0,01 - ¦82,6 ¦5,1 ¦2,3 ¦+/- 4,7 ¦
¦ ¦ ¦0,1 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------+-------+---------+----------+--------+--------+---------+
¦Зерно ¦0,01 ¦0,01 - ¦79,0 ¦5,8 ¦2,6 ¦+/- 5,4 ¦
¦ ¦ ¦0,1 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------+-------+---------+----------+--------+--------+---------+
¦Солома ¦0,05 ¦0,05 - ¦82,0 ¦4,1 ¦1,9 ¦+/- 3,8 ¦
¦ ¦ ¦0,5 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------+-------+---------+----------+--------+--------+---------+
¦Зеленая¦0,05 ¦0,05 - ¦80,2 ¦5,6 ¦2,5 ¦+/- 5,2 ¦
¦масса ¦ ¦0,5 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------+-------+---------+----------+--------+--------+---------+
¦Зерно ¦0,01 ¦0,01 - ¦78,1 ¦5,3 ¦2,4 ¦+/- 5,0 ¦
¦кукуру-¦ ¦0,1 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦зы ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+-------+-------+---------+----------+--------+--------+---------+
¦Семена ¦0,05 ¦0,05 - ¦79,6 ¦5,4 ¦2,4 ¦+/- 5,0 ¦
¦льна ¦ ¦0,5 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
L-------+-------+---------+----------+--------+--------+----------
2.2. Реактивы, растворы, материалы
Просульфурон с содержанием д.в. 99,5% (Сингента, Швейцария).
Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.
Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-82.
Вода бидистиллированная, ГОСТ 7602-72.
Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.
Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76.
Калий фосфорнокислый однозамещенный, ч.д.а., ГОСТ 4198-75.
Кальция хлорид, х.ч., ГОСТ 4161-77.
Кислота ортофосфорная, 85,6%, х.ч., ГОСТ 6552-80.
Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77.
Натрия гидроксид, х.ч., ГОСТ 4328-77.
Натрия сульфат безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.
Натрий фосфорнокислый двузамещенный, 2-х водный, ч.д.а., ГОСТ 11773-76.
Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.
Спирт метиловый, х.ч., ГОСТ 6995-77.
Фосфора пентоксид, ч., МРТУ 6-09-5759-69.
Хлористый метилен, ГОСТ 12794-80.
Элюент № 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан - ацетон (8:2, по объему).
Элюент № 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан - ацетон (7:3, по объему).
Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил - метанол - 0,005 М ортофосфорная кислота (38:10:52, по объему).
Силикагель марки Л (40 - 100 мкм) для колоночной хроматографии (Хемапол, Чехия) 1 степени активности, или силикагель КСК (60 - 100 меш).
Стекловата.
Хлопковая вата.
Фильтры бумажные, синяя лента, ТУ 6-09-1678.
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Knauer (Германия) или аналогичный.
Хроматографическая колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, заполненная Диасфером 110-С18 или Диасорбом 130-С16 Т (ЗАО БиоХимМак СТ, РФ; 119899, Москва, Ленинские горы).
Шприц для ввода образцов в жидкостной хроматограф.
Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74.
Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.
Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73.
Иономер ЭВ-74, ГОСТ 22261-76, или аналогичный.
Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79 или аналогичная.
Ротационный испаритель тип ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.
Сито с диаметром отверстий 1 мм.
Баня ультразвуковая, модель D 50, Branson Instr. Co., США или аналогичная.
Воронка Бюхнера, ГОСТ 0147-73.
Воронки делительные вместимостью 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.
Колба Бунзена, ГОСТ 5614-75.
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 9737-70.
Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 1000 мл, ГОСТ 1770-74.
Колбы грушевидные вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 25336-82.
Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74Е.
Пробирки градуированные с притертыми пробками вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 10515-75.
Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 1770-74.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (№ 2051-79 от 21.08.79).
Отобранные пробы зерна, семян и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более трех месяцев. Пробы зеленой массы замораживают при температуре -18 °С и хранят в морозильной камере не более трех месяцев. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 2 дней, при температуре -18 °С в течение месяца.
Пробы почвы высушивают при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света до воздушно-сухого состояния и хранят в темном сосуде не более трех месяцев.
Перед анализом зерно, семена и солому размалывают на мельнице, зеленую массу измельчают ножницами, сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л
ацетона 10 г KMnO и 2 г K CO ).
4 2 3
Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °С в течение 2 часов.
2.5.2. Приготовление 2 М и 0,005 М растворов ортофосфорной
кислоты
Для получения 2 М раствора H PO отмеряют 137 мл 85,6%-ной
3 4
ортофосфорной кислоты, переносят в мерную колбу емкостью 1000 мл,
добавляют 500 - 600 мл бидистиллированной воды, перемешивают и
доводят объем водой до метки.
Для получения 0,005 М раствора Н РО отбирают 2,5 мл
3 4
приготовленного 2 М раствора ортофосфорной кислоты, переносят в
колбу на 1000 мл, добавляют бидистиллированную воду до метки и
перемешивают.
2.5.3. Приготовление фосфатного буферного раствора № 1 (рН 7)
0,73 г Na HPO х 2H O и 0,38 г KH PO переносят в мерную колбу
2 4 2 2 4
емкостью 250 мл, добавляют 150 - 200 мл бидистиллированной воды,
перемешивают до полного растворения осадка, доводят водой до
метки, контролируют рН полученного раствора с помощью иономера,
доводя его значение до 7 с помощью 1 № раствора гидроксида
натрия.
2.5.4. Приготовление фосфатного буферного раствора № 2 (рН 10)
1,42 г безводного Na HPO и 40 г NaCl растворяют в химическом
2 4
стакане в 400 мл воды и доводят рН раствора до 10 путем добавления
по каплям 1 № раствора гидроксида натрия при перемешивании.
Щелочность раствора контролируют с помощью иономера.
2.5.5. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
При подготовке подвижной фазы для анализа просульфурона отмеряют 380 мл ацетонитрила и 100 мл метанола, переносят в колбу на 1000 мл, добавляют 520 мл 0,005 М ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют, дегазируют.
2.5.6. Кондиционирование колонки
Промыть колонку для ВЭЖХ 20 мл смеси ацетонитрил - вода (1:1, по объему), а затем смесью ацетонитрил - метанол - 0,005 М ортофосфорная кислота (38:10:52, по объему) (п. 2.5.2) в течение 30 минут при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизации базовой линия (5 - 15 минут).
2.5.7. Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор просульфурона с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г вещества в метаноле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре -12 °С не более одного месяца.
Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,025; 0,05; 0,125 и 0,25 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора просульфурона соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.5) непосредственно в день проведения анализа. Раствор хранят в холодильнике не более суток.
При изучении полноты открывания просульфурона в модельных матрицах используются ацетоновые растворы вещества.
2.5.8. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора просульфурона с концентрацией 0,025; 0,05; 0,125 и 0,25 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации препарата в растворе в мкг/мл.
2.5.9. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,0 см вставляют тампон из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 30 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и колонку последовательно промывают 20 мл элюента № 2 (гексан - ацетон, 7:3) и 20 мл элюента № 1 (гексан - ацетон, 8:2) со скоростью 1 - 2 капли в секунду.
2.5.10. Проверка хроматографического поведения просульфурона на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора просульфурона с концентрацией 20 мкг/мл, отдувают растворитель потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл элюента № 1 и наносят на подготовленную колонку. Промывают колонку 20 мл элюента № 1 и затем 50 мл элюента № 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 5 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.5) и анализируют на содержание просульфурона по п. 2.7.
Фракции, содержащие просульфурон, объединяют и вновь анализируют по п. 2.7. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
Примечание: Профиль вымывания просульфурона с колонки может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
2.6. Описание определения
2.6.1.1. Вода. К образцу предварительно отфильтрованной воды
объемом 100 мл добавляют 1,18 г Na HPO х 2H O, перемешивают до
2 4 2
растворения соли и рН раствора доводят до 10 с помощью 1 N
раствора гидроксида натрия. Полученный раствор переносят в
делительную воронку емкостью 250 мл, промывают смесью
гексан - хлористый метилен (20:80, по объему) трижды (25 + 15 +
+ 10 мл), которую отбрасывают. Водную фазу подкисляют 2 М
ортофосфорной кислотой до рН 3 (контролируя его значения на
иономере), переносят в делительную воронку и просульфурон
экстрагируют смесью гексан - хлористый метилен (65:35, по объему)
трижды (30 + 2 х 15 мл). Объединенную органическую фазу
пропускают через 1-см слой хлопковой ваты и упаривают на
роторном испарителе досуха при температуре 30 °С. Сухой остаток
растворяют в 4 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.5) и
анализируют на содержание просульфурона по п. 2.7.
2.6.1.2. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 125 мл 90%-ного водного ацетонитрила и встряхивают в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. Суспензию помещают в ультразвуковую баню на 3 минуты и затем фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Остаток почвы на фильтре промывают 75 мл 90%-ного ацетонитрила. Из объединенного фильтрата отбирают аликвоту раствора (около 45 мл), эквивалентную 5 г почвы. Дальнейшую очистку проводят по пп. 2.6.2 и 2.6.3.
2.6.1.3. Зерно, семена, зеленая масса, солома. Навеску (10 г) размолотого зерна помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 125 мл смеси метанол - фосфатный буфер № 1 рН 7,0 (80:20, по объему) и перемешивают в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. Суспензию помещают в ультразвуковую баню на 3 минуты и затем фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Остаток на фильтре промывают 75 мл смеси метанол - фосфатный буфер № 1 (80:20, по объему). Из объединенного фильтрата отбирают аликвоту раствора (около 45 мл), эквивалентную 2,5 г зерна.
Навеску (10 г) размолотых семян льна помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 125 мл 90%-ного водного ацетонитрила и перемешивают в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. Суспензию помещают в ультразвуковую баню на 1 минуту и затем фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Остаток на фильтре промывают 75 мл 90%-ного ацетонитрила. Из объединенного фильтрата отбирают аликвоту раствора (около 45 мл), эквивалентную 2,5 г семян.
Навеску (20 г) измельченной зеленой массы помещают в коническую колбу емкостью 500 мл, приливают 200 мл смеси метанол - фосфатный буфер № 1 (80:20, по объему) и встряхивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Остаток на фильтре промывают 75 мл смеси метанол - фосфатный буфер № 1. Из объединенного фильтрата отбирают аликвоту раствора (около 25 мл), эквивалентную 2 г ткани.
Навеску (5 г) размолотой соломы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл 90%-ного водного ацетонитрила и встряхивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Остаток на фильтре промывают 75 мл 90%-ного ацетонитрила. Из объединенного фильтрата отбирают аликвоту раствора (около 65 мл), эквивалентную 2 г соломы. Дальнейшую очистку экстрактов проводят по пп. 2.6.2 и 2.6.3.
2.6.2. Очистка экстрактов
Отобранные аликвоты растительного (из п. 2.6.1.3) и почвенного (из п. 2.6.1.2) экстрактов упаривают до водного остатка (объем 10 - 15 мл) на роторном испарителе при температуре 40 °С. К оставшемуся водному раствору добавляют 30 мл фосфатного буфера № 2 рН 10 (п. 2.5.4), при необходимости доводят рН раствора до 10 с помощью 2 № раствора гидроксида натрия. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 - 150 мл, промывают трижды смесью гексан - хлористый метилен (20:80, по объему) порциями по 25 мл, которую отбрасывают. Водную фазу переносят в химический стакан и подкисляют 2 М ортофосфорной кислотой до рН 3. Переносят раствор вновь в делительную воронку и просульфурон трижды (30 + 2 х 15 мл) экстрагируют смесью гексан - хлористый метилен (65:35, по объему). Объединенную органическую фазу пропускают через 1-см слой хлопковой ваты и упаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30 °С.
2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем
Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 2.6.2 экстрактов зерна, семян, зеленой массы, соломы и почвы, переносят 3 порциями (2 + 2 + 1 мл) элюента № 1 (гексан - ацетон, 8:2) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.9). Колонку промывают 25 мл элюента № 1, которые отбрасывают. Вещество элюируют 30 мл элюента № 2 (гексан - ацетон, 7:3), отбрасывая первые 15 мл и собирая последующие 15 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток экстрактов зерна и семян растворяют в 1 мл, почвы - в 2 мл, а зеленой массы и соломы - в 4 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.5) и анализируют на содержание просульфурона по п. 2.7.
Примечание: При использовании новой партии сорбента или растворителей проводится проверка хроматографического поведения просульфурона на колонке с силикагелем.
2.7. Условия хроматографирования
Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Knauer (Германия).
Хроматографическая колонка стальная, 4 х 150 мм, заполненная Диасфером 110-С18 (5 мкм).
Подвижная фаза: ацетонитрил - метанол - 0,005 М ортофосфорная кислота (38:10:52, по объему).
Скорость потока элюента: 1 мл/мин.
Температура колонки: комнатная.
Рабочая длина волны: 226 нм.
Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 20 мкл.
Минимально определяемое количество просульфурона - 0,5 нг.
Время выхода просульфурона: около 14 мин.
Альтернативная неподвижная фаза: Диасорб 130-С16Т (5 мкм).
Подвижная фаза: ацетонитрил - метанол - 0,005 М ортофосфорная кислота (35:10:55, по объему).
Время выхода просульфурона: около 12 мин.
Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.
Образцы, дающие пики большие чем стандартный раствор концентрацией 0,25 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
2.8. Обработка результатов анализа
Содержание просульфурона рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
Н х А х V
1
Х = ----------,
Н х m
0
где:
Х - содержание просульфурона, мг/куб. дм или мг/кг;
Н - высота пика образца, мм;
1
Н - высота пика стандарта, мм;
0
А - концентрация стандартного раствора просульфурона , мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,
мл;
m - масса или объем анализируемой части образца, г или мл (для
воды - 100 мл; для почвы, зерна и соломы соответственно - 5, 2,5 и
2 г).
3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
4. КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.
5. РАЗРАБОТЧИКИ
Назарова Т.А., науч. сотр., канд. биол. наук; Микитюк О.Д., ст. науч. сотр., канд. биол. наук; Макеев А.М., зав. лабораторией, канд. биол. наук.
ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.
------------------------------------------------------------------
--------------------
| | |
|
